第二节　荧光抗体的制备

《实用免疫细胞与核酸》

• 前言
• 第一章　总论
  • 第一节　有关的免疫学理论（缺）
  • 第二节　免疫细胞化学的有关技术概述 节
    • 一、抗体的制备和配制 节
    • 二、组织材料的处理 节
    • 三、免疫染色 节
    • 四、对照 节
    • 五、免疫细胞化学结果的判断 节
  • 第三节　有关细胞和组织学技术 节
    • 一、细胞和组织 节
    • 二、细胞和组织的固定 节
    • 三、组织切片技术 节
  • 参考文献
• 第二章　抗原和抗体的制备
  • 第一节　抗原的制备（缺）
  • 第二节　抗体的制备 节
    • 一、抗血清的制备 节
    • 二、单克隆抗体的制备 节
      • （一）动物的选择与免疫 节
      • （二）细胞融合 节
      • （三）选择杂交瘤细胞及抗体检测 节
      • （四）杂交瘤的克隆化 节
      • （五）杂交瘤细胞的冻存与复苏 节
      • （六）单克隆抗体的大量生产 节
      • （七）单克隆抗体的鉴定 节
  • 第三节　抗体的提取与纯化（缺）
• 第三章　免疫荧光细胞化学技术
  • 第一节　免疫荧光细胞化学的原理 节
    • 一、直接法 节
    • 二、间接法 节
    • 三、补体法 节
    • 四、双重免疫荧光标记法 节
    • 五、对照试验 节
  • 第二节　荧光抗体的制备 节
    • 一、荧光素 节
      • （一）异硫氰酸荧光素（Fluoresceinisothiocyanate, GITC） 节
      • （二）四乙基罗达明（tetraethylrodamineB200, RB200） 节
      • （三）四甲基异硫氰酸罗达明（tetramethylrhodamineisothiocyanate, TMRITC） 节
    • 二、荧光素标记抗体的方法 节
      • （一）FITC标记抗体的方法 节
      • （二）四乙基罗达明标记抗体方法 节
      • （三）四甲基异硫氰酸罗达明标记抗体方法 节
      • （四）藻红蛋白标记抗体的方法 节
      • （五）PE-标记蛋白A方法 节
      • （六）蓝色荧光素标记抗体方法 节
    • 三、荧光抗体质量控制 节
      • （一）染色特异性和敏感性的测定 节
      • （二）F/P比值的测定 节
    • 四、荧光抗体的保存 节
  • 第三节　免疫荧光细胞化学染色方法 节
    • 一、标本制作 节
    • 二、荧光抗体染色方法 节
      • （一）直接法 节
      • （二）间接法 节
      • （三）补体法 节
      • （四）膜抗原荧光抗体染色法 节
      • （五）双重染色法 节
      • （六）荧光抗体再染色法 节
    • 三、荧光抗原染色法 节
  • 第四节　荧光显微镜检查法 节
    • 一、荧光显微镜 节
      • （一）光源 节
      • （二）滤色系统 节
      • （三）反光镜 节
      • （四）聚光镜 节
      • （五）物镜 节
      • （六）目镜 节
      • （七）落射光装置 节
    • 二、荧光显微镜标本制作要求 节
    • 三、使用荧光显微镜的注意事项 节
    • 四、荧光图像的记录方法 节
  • 第五节　非特异性染色的消除方法 节
    • 一、非特异性染色的主要因素 节
    • 二、消除非特异性染色的方法 节
      • （一）动物脏器粉末吸收法 节
      • （二）透析法 节
      • （三）葡聚糖凝胶G-50柱层析法 节
      • （四）DEAE纤维素柱层析法 节
      • （五）荧光抗体稀释法 节
      • （六）纯化抗原法 节
      • （七）纯化抗体法---免疫吸收法 节
      • （八）伊文氏蓝（Evans blue）衬染法 节
  • 参考文献
• 第四章　免疫酶细胞化学
  • 第一节　固定和切片 节
    • 一、固定 节
    • 二、切片 节
  • 第二节　染色方法 节
    • 一、本科标抗体法 节
      • （一）酶的种类及特点 节
      • （二）本科标抗体的制备（Boosma,DM, 1983） 节
      • （三）酶标抗体的纯化 节
      • （四）染色原理及步骤 节
    • 二、非标记抗体酶法 节
      • （一）酶桥法 节
      • （二）PAP法 节
  • 第三节　结果分析 节
    • 一、对照实验 节
    • 二、假阳性及其处理 节
    • 三、抗体有关事项 节
    • 四、单克隆抗体 节
    • 五、增加染色强度方法 节
  • 第四节　ICC的几种特殊应用 节
    • 一、ICC在铺片中应用 节
    • 二、ICC的双重染色法 节
      • （一）切片 节
      • （二）染色 节
    • 三、ICC在细胞功能研究中的应用 节
    • 四、 ICC在原位杂交技术中的应用 节
  • 参考文献
• 第五章　免疫金银及铁标记技术
  • 第一节　免疫金技术发展史
  • 第二节　溶胶的基本概念 节
    • 一、胶体金 节
    • 二、胶体金的一般性状 节
  • 第三节　胶体金的制备方法 节
    • 一、制备胶体金的准备 节
    • 二、制备胶体金的方法和步骤 节
      • （一）白磷还原法 节
      • （二）抗体血酸还原法（Stathis and Fabrikanos 1958） 节
      • （三）柠檬酸三钠还原法（Frens 1973） 节
      • （四）鞣酸—柠檬酸三钠还原法（Slot与Gueeze1985年） 节
      • （五）乙醇超声波还原法（Baigent and Muller 1980） 节
      • （六）硼氢化钠还原法（Tschopp et al 1982） 节
      • （七）放射性胶体金的制备方法（Kent and Allen 1981） 节
  • 第四节　胶体金的质量鉴定 节
    • 一、胶体金颗粒直径测定 节
    • 二、胶体金金颗粒均匀度测定 节
    • 三、影响胶体金颗粒大小的因素 节
  • 第五节　胶体金标记物的制备 节
    • 一、待标记蛋白质的准备 节
    • 二、胶体金pH值的调整 节
    • 三、待标记蛋白质最适稳定量的测定 节
    • 四、蛋白质的胶体金标记 节
    • 五、胶体金标记蛋白质的纯化 节
      • （一）调整与超速离心法 节
      • （二）凝胶过滤法 节
    • 六、免疫金探针的鉴定 节
  • 第六节　免疫胶体金银细胞化学染色的固定剂选择 节
    • 一、固定剂的选择及固定时间（详见表5-9） 节
    • 二、切片的处理与粘附。 节
  • 第七节　光镜免疫金银细胞化学方法 节
    • 一、免疫金染色 节
      • （一）免疫金法（IGS） 节
      • （二）蛋白A-金（PAG）放大法 节
    • 二、免疫金银法 节
      • （一）石蜡切片的IGSS染色 节
      • （二）冰冻切片的IGSS染色 节
      • （三）半薄切片的IGSS染色 节
    • 三、彩色免疫金银法（CIGSS） 节
    • 四、免疫金及免疫金银技术的优点 节
    • 五、在IGSS染色中常见技术问题和对策 节
    • 六、物理显影液及缓冲液的配制 节
  • 第八节　免疫胶体铁细胞化学 节
    • 一、胶体铁的制备方法 节
    • 二、抗体的标记和纯化 节
    • 三、胶体铁标记抗体的鉴定 节
    • 四、免疫胶体铁细胞化学染色 节
    • 五、方法的应用 节
  • 参考文献
• 第六章　亲合组织化学技术及免疫细胞化学技术的某些进展
  • 第一节　抗生物素—生物素免疫细胞化学染色法 节
    • 一、基本原理 节
    • 二、几中抗生物素—生物素染色法 节
      • 1．抗生物素—生物素—过氧化酶复合物技术（Avidin Biotin–Peroxidase Complex technique, 简称ABC技术） 节
      • 2．桥抗生物素—生物素技术（Bridged Avidin –Biotin technique, 简称BRAB技术） 节
      • 3．标记生物素—抗生物素技术（Labelled Avidin—Biotin technique, LAB技术） 节
  • 第二节　葡萄球菌蛋白A（SPA） 节
    • 一、SPA的性质 节
    • 二、SPA的应用 节
    • 三、SPA在免疫细胞化学染色中的应用 节
  • 第三节　凝集素 节
    • 一、凝集素的特性 节
    • 二、凝集素的应用 节
    • 三、凝集素在免疫细胞化学中的应用 节
    • 四、HRP标记凝集素及凝集素抗体的制备 节
  • 第四节　免疫细胞化学技术的某些新进展
  • 参考文献
• 第七章　电子显微镜免疫细胞化学技术
  • 第一节　电子显微镜免疫细胞化学技术概述 节
    • 一、组织固定与取材 节
    • 二、免疫染色 节
    • 三、包埋 节
    • 四、对照试验 节
  • 第二节　免疫铁蛋白技术 节
    • 一、基本原理 节
    • 二、铁蛋白的提取和纯化 节
    • 三、铁蛋白与免疫球蛋白的结合 节
    • 四、电镜标本的制备方法 节
  • 第三节　免疫酶细胞化学技术 节
    • 一、基本原理 节
    • 二、电镜标本制备方法 节
      • 1．单层细胞培养物免疫酶染色法 节
      • 2．组织切片酶标记抗体染色法 节
      • 3．PAP包埋前染色法（Pickel 等，1975） 节
      • 4．PAP包埋后染色法（Ordronneau, 1982） 节
      • 5．PAP免疫电镜双重标记 节
  • 第四节　免疫电镜胶体金标记法 节
    • 一、电镜水平的免疫金染色法 节
      • 1．包埋后染色 节
      • 2．包埋前染色 节
    • 二、胶体金标记蛋白A技术（Protein A-goldtechnique, PAg法） 节
      • 1．蛋白A—金（PAg）复合物的制备（Slot 和Geuze,1981） 节
      • 2． 节
    • 三、胶体金双标记技术（常用为蛋白A—胶体金） 节
    • 四、免疫电镜金—银法染色技术 节
  • 第五节　其它免疫电镜技术 节
    • 一、凝集素电镜标记技术 节
    • 二、扫描免疫电镜技术 节
      • （一）标记物 节
      • （二）免疫标记方法 节
      • （三）扫描免疫电镜的具体操作步骤 节
    • 三、冷冻蚀刻免疫电镜技术 节
      • 1．冷冻蚀刻表面标记免疫电镜技术 节
      • 2．断裂—标记免疫电镜技术 节
  • 参考文献
• 第八章　蛋白质与多肽激素的放射免疫分析
  • 第一节　概述 节
    • 一、放射免疫分析的优缺点 节
    • 二、基本原理 节
  • 第二节　放射性碘标记 节
    • 一、同位素的选择 节
    • 二、蛋白质与多肽激素的放射性碘标记 节
      • （一）氯胺T法 节
      • （二）乳过氧化物酶法（LPO） 节
      • （三）Iodogen碘化法 节
      • （四）酰化试剂（Bolton和Hunter试剂）法 节
    • 三、放射性标记化合物的纯化与鉴定 节
      • （一）纯化标记化合物的常用方法 节
      • （二）标记化合物的主要质量指标 节
  • 第三节　结合和游离部分的分离 节
    • 一、对分离方法的要求 节
    • 二、常用的分离方法 节
  • 第四节　样品的前处理 节
    • 一、脑、脊髓与垂体中神经肽的提取（以大鼠为例） 节
    • 二、大鼠脑神经核团微穿孔取样方法（以下丘脑为例） 节
    • 三、内脏、肿瘤组织中神经肽的提取（以胃粘膜为例） 节
    • 四、血浆 节
    • 五、脑脊液 节
    • 六、尿 节
    • 七、胃液 节
  • 第五节　放射免疫分析法的建立 节
    • 一、放射免疫分析的基本试剂 节
    • 二、加样程序 节
    • 三、放射免疫分析的质量控制 节
  • 参考文献
• 第九章　免疫细胞化学与图像分析
• 第十章　流式细胞术（FCM）在免疫细胞化学中的应用
  • 第一节　流式细胞术简介 节
    • 一、流式细胞术发展简史 节
    • 二、流式细胞计的基本结构和工作原理 节
  • 第二节　FCM在生物医学工程学方面的应用 节
    • 一、FCM应用的技术途径 节
    • 二、FCM的典型应用简介 节
  • 第三节　FCM对外周白细胞的免疫荧光分析 节
    • 一、白细胞的免疫荧光标记技术 节
    • 二、白细胞免疫荧光分析的数据分析 节
    • 三、淋巴细胞亚群的测定及其在临床医学中的实用意义 节
  • 参考文献
• 第十一章　免疫细胞化学在神经科学中的应用
  • 一、确定神经递质的性质、定性和分布
  • 参考文献
  • 二、探查和发现新的神经递质
  • 三、追踪神经束的行径及其投射区
  • 四、区别神经细胞、神经胶质细胞和神经内分泌细胞
  • 五、研究神经递质的超威结构定位
  • 六、神经递质共存的研究
  • 七、个体和种族发育的研究
  • 八、与神经组织培养技术相结合进行神经生物科学的研究
  • 九、应用于受体的研究
  • 十、神经系统的机能研究
• 第十二章　肿瘤免疫细胞化学
  • 第一节　神经肿瘤免疫细胞化学 节
    • 一、细胞骨架中的中间丝蛋白 节
      • （一）神经细丝酸性蛋白 节
      • （二）神经细丝 节
    • 二、神经特异性烯醇化酶 节
    • 三、S—100蛋白 节
  • 第二节　神经内分泌肿瘤免疫细胞化学 节
    • 一、生体腺瘤 节
    • 二、胰岛细胞瘤 节
    • 三、甲状腺髓样癌 节
    • 四、肺支气管类癌及肺小细胞癌 节
    • 五、食管燕麦细胞癌 节
    • 六、皮肤神经内分泌癌（Merkel细胞瘤） 节
  • 第三节　软组织与骨肿瘤细胞化学 节
    • 一、常用标记抗体 节
    • 二、软组织肿瘤免疫组织化学 节
    • 三、骨及软骨肿瘤免疫细胞化学标记 节
  • 第四节　免疫活性细胞及其肿瘤的免疫细胞学 节
    • 一、免疫活性细胞的免疫细胞化学 节
      • （一）B淋巴细胞 节
      • （二）T淋巴细胞 节
      • （三）NK细胞/K细胞 节
      • （四）单核/巨噬细胞与网状细胞 节
    • 二、恶性淋巴瘤的免疫细胞化学标记 节
      • （一）恶性淋巴瘤与淋巴网状组织反应性增生的鉴别诊断 节
      • （二）恶性淋巴瘤与非淋巴瘤网状组织肿瘤的鉴别 节
      • （三）恶性淋巴瘤的免疫细胞分型 节
      • （四）在恶性淋巴瘤免疫表型分析中的注意事项 节
  • 第五节　上皮组织肿瘤免疫细胞化学 节
    • 一、角蛋白 节
    • 二、器官特异性及其它瘤标记物 节
      • （一）上皮膜抗原 节
      • （二）桥粒蛋白 节
      • （三）癌胚抗原 节
      • (四)甲胎蛋白 节
      • （五）前列腺特异性抗原和前列腺酸性磷酸酯酶 节
      • （六）CA19-9及CA50 节
      • （七）CA125 节
      • （八）神经元特异性烯醇化酶 节
      • （九）甲状腺球蛋白和降钙素 节
      • （十）血型抗原 节
  • 参考文献
• 第十三章　消化器官免疫细胞化学
  • 第一节　胃肠道粘膜免疫细胞化学特点 节
    • 一、抗原的稳定性 节
    • 二、抗体的特异性 节
    • 三、染色技术的选择性 节
    • 四、结果的可比性 节
  • 第二节　胃肠道粘膜抗体产生细胞 节
    • 一、抗体产生细胞的特点 节
    • 二、双标记免疫荧光染色 节
    • 三、临床意义 节
  • 第三节　消化道分泌生IgA 节
    • 一、S IgA合成及其功能 节
    • 二、对比免疫荧光染色 节
    • 三、临床意义 节
  • 第四节　胃肠道粘膜T淋巴细胞 节
    • 一、T淋巴细胞分布及其特点 节
    • 二、研究方法 节
    • 三、临床意义 节
  • 第五节　癌胚抗原的免疫细胞化学 节
    • 一、癌胚抗原的特点 节
    • 二、癌胚抗原的免疫细胞化学染色 节
    • 三、临床意义 节
  • 第六节　胃肠道溶菌酶 节
    • 一、溶菌酶在胃肠道的分布 节
    • 二、溶菌酶的免疫细胞化学染色特点 节
    • 三、溶菌酶的研究的临床意义 节
  • 第七节　消化管壁内神经丛的免疫细胞化学 节
    • 一、内源性神经的结构 节
    • 二、消化道全层铺片技术 节
  • 第八节　肝脏疾病免疫细胞化学 节
    • 一、乙型肝炎免疫细胞化学 节
    • 二、肝硬变免疫细胞化学 节
    • 三、肝癌免疫细胞化学 节
  • 参考文献
• 第十四章　肾脏疾病免疫细胞化学
  • 第一节　免疫细胞化学技术在肾脏疾病中的应用范围 节
    • 一、肾脏组织的检查 节
    • 二、血清或肾脏洗脱液的检查 节
    • 三、尿液的检查 节
    • 四、肾小球细胞的体外培养 节
  • 第二节　荧光或酶标抗体在肾脏内显示的部位及形式 节
    • 一、肾小球毛细血管壁 节
    • 二、肾小球系膜区 节
    • 三、肾小球毛细血管壁及系膜区 节
    • 四、新月体性 节
    • 五、肾小球球囊腔 节
    • 六、肾小管 节
    • 七、小动脉 节
    • 八、紧间质 节
  • 第三节　免疫细胞化学技术在肾脏疾病中应用的意义 节
    • 一、免疫荧光或免疫酶标技术在肾脏疾病中的应用的意义 节
    • 二、免疫电镜技术在肾脏疾病中应用的意义 节
  • 第四节　各种肾脏疾病的病变以及免疫荧光（酶标）表现特征 节
    • 一、原发性肾小球疾病 节
    • 二、继发于全身性疾患的肾小球疾病 节
    • 三、结缔组织病时的肾脏损害 节
    • 四、血管性疾患导致肾脏的损害 节
    • 五、代谢性疾患引起的肾脏损害 节
    • 六、某些特殊疾病时的肾脏损害 节
    • 七、遗传性和先天性肾病 节
    • 八、杂病 节
    • 九、肾移植 节
    • 十、肾小管间质性疾病 节
  • 参考文献
• 第十五章　自身抗体的免疫组织化学检测方法和应用
  • 第一节　自身抗体的免疫组织化学检测方法
  • 第二节　在研究和诊断自身免疫性疾病中的应用 节
    • 一、抗核抗体（Antinuclearantibodies, ANA）的检测 节
    • 二、双链DNA抗体（Double strand DNA antibody, dsDNA）的检测方法和应用 节
    • 三、抗核仁抗体的检测法 节
    • 四、抗组蛋白抗体的检测方法 节
    • 五、抗着丝点抗体的检测方法 节
    • 六、抗甲状腺自身抗体（ThyroidAutoantiodies）的检测方法 节
    • 七、平滑肌抗体（Smooth muscle antibody , SMA）的检测 节
    • 八、肝细胞膜抗体（Antibodyto the hepatocyte membrane, HMA）的检测 节
    • 九、线粒体抗体（Mitochondrial antibody, AMA） 节
    • 十、胃壁细胞抗体（Gastricparietal cell antibodies, PCA）的检测 节
    • 十一、胃泌素细胞抗体（GastrinCell antibodies, GCA）的检测 节
    • 十二、胰岛细胞抗体（Isletcell antibady, ICAb）的检测 节
    • 十三、抗肾小球和肺泡基底膜抗体的检测 节
    • 十四、抗皮肤成分自身抗体的检测 节
    • 十五、唾液腺外分泌导管上皮自身抗体的检测 节
    • 十六、抗横纹肌自身抗体的检测 节
    • 十七、肾上腺自身抗体的检测 节
    • 十八、类风湿因子（Rheumatoidfactor）的检测 节
    • 十九、抗中性白细胞胞浆自身抗体（Anti－eutrophilcytoplasmic autoantibody ANCA） 节
    • 二十、增殖细胞核抗原抗体（Proliferativecell nuclear antigen antibody, PCNA） 节
    • 二十一、抗类风湿关节　炎相关核抗原的抗体（Antirheu－matoidarthritis associated nuclear antigen antibody, RANA） 节
    • 二十二、抗精子抗体（Anti-spermantibody, ASA） 节
    • 二十三、其他自身抗体的检测 节
  • 第三节　自身抗体产生的机理 节
    • 一、自身淋巴细胞免疫调控反应紊乱学说 节
    • 二、T细胞旁路（t cell by - pass）学说 节
    • 三、独特型-抗独特型网络缺陷学说 节
    • 四、遗传因素 节
  • 参考文献
• 第十六章　病原体的免疫细胞化学快速检查方法和应用
  • 第一节　在细菌学中的应用 节
    • 一、甲组溶血性链球菌的快速检查法 节
    • 二、脑膜炎双球菌的快速检查法 节
    • 三、霍乱弧菌和副霍乱弧菌的快速检查法 节
    • 四、鼠疫杆菌的快速检查法 节
    • 五、炭疽杆菌的快速检查法 节
    • 六、致病性大肠杆菌的快速检查法 节
    • 七、结核杆菌的快速诊断方法 节
    • 八、其他细菌的快速检查方法 节
    • 九、钩端螺旋体的检查法 节
    • 十、梅毒螺旋体的检查法 节
  • 第二节　在病毒学中的应用 节
    • 一、病毒抗原定位 节
    • 二、病毒感染过程 节
    • 三、肿瘤与病毒 节
    • 四、病毒计数 节
  • 第三节　在寄生虫学中的应用 节
    • 一、血吸虫病 节
    • 二、疟疾 节
    • 三、阿米巴病 节
    • 四、锥虫病 节
    • 五、丝虫病 节
    • 六、弓形虫病 节
    • 七、旋毛虫病 节
    • 八、其他寄生虫病 节
  • 第四节　在真菌学中的应用
  • 参考文献
• 第十七章　免疫细胞化学在皮肤病学的应用
  • 第一节　角朊细胞 节
    • 一、对角质层抗原与角质层自身抗体、角蛋白抗原的研究 节
    • 二、对天疱疮的研究 节
    • 三、HLA-DR抗原 节
    • 四、凝集素受体 节
    • 五、其它 节
  • 第二节　黑素细胞及其肿瘤 节
    • 一、正常黑素细胞 节
    • 二、色素痣 节
    • 三、恶性黑素瘤 节
  • 第三节　Merkel细胞 节
    • 一、免疫细胞化学在Merkel细胞起源和功能认识中的作用 节
    • 二、Merkel细胞癌的免疫细胞化学诊断 节
  • 第四节　郎格罕细胞 节
    • 一、研究LC自身的表面标记 节
    • 二、研究皮肤病中LC数量、密度及结构的改变 节
  • 第五节　真皮与表皮交界 节
    • 一、基底膜带 节
    • 二、狼疮带试验（LupusBand Test, LBT） 节
  • 第六节　免疫细胞化学技术在真皮纤维化性疾病研究中的应用 节
    • 一、确定细胞外基质成分在真皮的分布 节
    • 二、研究纤维化皮损中细胞的表型特征和（或）功能状态 节
    • 三、检测与纤维发生有关的细胞因子 节
    • 四、其它 节
  • 第七节　真皮浸润细胞免疫表达 节
    • 一、T淋巴细胞及其亚群的免疫表达 节
    • 二、B淋巴细胞和免疫球蛋白的表达 节
    • 三、其它 节
  • 第八节　汗腺及汗腺肿瘤的免疫细胞化学特点
  • 参考文献
• 第十八章　核酸分子杂交技术概述
  • 第一节　核酸的分子结构 节
    • 一、核酸的化学组成 节
    • 二、核酸的一级结构 节
    • 三、核酸的高级结构 节
      • （一）DNA 节
      • （二）RNA 节
    • 四、基本组织 节
  • 第二节　DNA的变性与复性 节
    • 一、DNA变性 节
    • 二、复性 节
  • 第三节　分子杂交 节
    • 一、概述 节
    • 二、探针-靶反应 节
    • 三、核酸探针的种类 节
      • （一）DNA探针 节
      • （二）cDNA探针 节
      • （三）RNA探针 节
      • （四）寡核酸探针 节
    • 四、核酸探针的标记和检测（详见每十九章　） 节
      • （一）核酸探针的常用酶促标记技术 节
      • （二）核酸探针的非放射性标记技术 节
      • (三）非放射性探针的显示体系 节
    • 五、核酸分子杂交的类型 节
      • （一）固相膜核酸分子杂交方法 节
      • （二）固相核酸分子杂交类型 节
      • （三）固相膜核酸杂交的几点说明 节
      • （四）液相核酸分子杂交类型 节
    • 六、核酸分子杂交实验因素的优化 节
  • 第四节　石蜡包埋组织的DNA提取及其应用 节
    • 一、石蜡包埋组织DNA提取的基本方法 节
    • 二、影响DNA提取质量的因素 节
    • 三、提高DNA提取质量的方法 节
    • 四、石蜡包埋组织DNA分析的方法学 节
    • 五、分子病理学研究中的应用 节
  • 参考文献
• 第十九章　核酸（基因）分子探针
  • 第一节　概述
  • 第二节　核酸（基因）探针目的核酸的制备技术 节
    • 一、特异性目的核酸（或基因）的制备 节
    • 二、目的核酸的扩增 节
  • 第三节　放射性同位素标记核酸探针 节
    • 一、缺口平移法 节
    • 二、末端标记法 节
    • 三、应用特异单引物法标记DNA探针 节
    • 四、双引物法标记DNA探针法 节
    • 五、聚合酶链反应（PCR）标记高活性DNA探针 节
  • 第四节　非放射性标记的核酸探针 节
    • 一、生物素标记核酸探针方法 节
    • 二、光敏生物素标记核酸探针 节
    • 三、生物素-补骨脂素（Biotin -psoralen）标记法 节
    • 四、生物素-α-氨基乙酸-N-羟基琥珀标记化学修饰的DNA法 节
    • 五、缺口平移法标记生物素DNA探针（二步法） 节
    • 六、生物素随机引物标记探针方法 节
    • 七、异羟基洋地黄毒甙（Digoxigenin）标记核酸探针 节
    • 八、光敏2，4-二硝基苯（光敏DNP）标记DNA法 节
    • 九、三硝基苯磺酸（TNBS）标记核酸探针 节
    • 十、生物素化的RNA探针标记 节
    • 十一、辣根过氧化物酶标记核酸探针法 节
    • 十二、用聚合酶链反应标记高活性DNA探针 节
  • 第五节　寡核苷酸探针的制备
  • 参考文献
• 第二十章　原位杂交组织化学
  • 第一节　原位杂交组织化学概述 节
    • 一、核酸分子杂交技术 节
    • 二、原位杂交组织化学技术的由来及发展 节
    • 三、原位杂交组织化学技术的基本方法 节
  • 第二节　cRNA探针在原位杂交组织化学（ISHH）中的应用 节
    • 一、同位素标记cRNA探针在ISHH中的应用 节
    • 二、生物素标记cRNA探针在原位杂交组织化学中的应用 节
    • 三、地高辛标记cRNA探针的应用 节
  • 第三节　DNA及寡核苷酸探针在原位杂交组织化学中的应用 节
    • 一、DNA探针的应用 节
    • 二、寡核苷酸探针的应用 节
  • 第四节　原位杂交组织化学与免疫细胞化学结合法 节
    • 一、同位素原位杂交组化与免疫组化PAP法的联合程序 节
    • 二、非同位素原位杂交组化与免疫组化联合法 节
  • 第五节　原位杂交免疫细胞化学技术的未来与展望 节
    • 一、PCR与原位杂交细胞化学结合法 节
    • 二、快速原位杂交细胞化学技术 节
    • 三、原位启动标记法 节
  • 参考文献
• 第二十一章　原位杂交技术在染色体和电镜水平的应用
  • 第一节　原位杂交技术在染色体铺片的应用 节
    • 一、有关染色体的基本知识及制片 节
      • （一）染色体的形态结构 节
      • （二）染色体G显带技术 节
      • （三）高分辨染色体G带技术 节
      • （四）外周血培养及染色体制片技术 节
    • 二、应用ISHH技术对染色体制片、基因分配（Chromosomalassignment of genes）的研究 节
    • 三、利用ISHH技术对肿瘤或癌前组织的细胞间期染色体铺片进行研究 节
    • 四、利用性染色体特异性DNA探针的ISHH技术 节
  • 第二节　原位分子杂交技术在电镜水平的应用 节
    • 一、应用同位素标记cRNA探针电镜原位杂交技术于染色体制片（Hutchison et al,1982） 节
    • 二、应用生物素标记DNA探针电镜原位杂交技术 节
    • 三、应用地高辛标记rRNA探针的电镜原位杂交技术 节
    • 四、结语 节
  • 参考文献
• 第二十二章　聚合酶链反应（PCR）技术的发展和应用
  • 第一节　概述
  • 第二节　PCR技术的原理
  • 第三节　PCR操作范例及反应体系的组成 节
    • 一、PCR操作范例 节
    • 二、PCR反应系统的组成 节
      • （一）PCR缓冲液（PCrBuffer） 节
      • （二）四种脱氧三磷酸核苷酸（4×dNTPs） 节
      • （三）引物的量 节
      • （四）TaqDNA聚合酶的量 节
      • （五）模板 节
      • （六）石蜡油 节
    • 三、电泳分析 节
    • 一、温度循环参数 节
    • 二、引物引物设计 节
    • 三、DNA聚合酶 节
    • 四、影响PCR特异性的因素 节
    • 五、扩增平坡 节
  • 第五节　PCR各处应用模式 节
    • 一、兼并引物（DegeneratePrimer）PCR 节
    • 二、套式引物（NestedPrimer）PCR 节
    • 三、复合PCR（Multiplex PCR） 节
    • 四、反向PCR（Inverse PCR或Reverse PCR） 节
    • 五、不对称PCR（Asymmetric PCR） 节
    • 六、标记PCR（LP-PCR）和彩色PCR 节
    • 七、加端PCR 节
    • 八、锚定PCR或固定PCR 节
    • 九、玻片PCR 节
    • 十、反转录PCR方法检测RNA 节
    • 十一、定量PCR 节
  • 第六节　样品处理与注意事项 节
    • 一、样品处理 节
    • 二、注意事项 节
  • 第七节　PCR仪器的发展
  • 第八节　PCR临床应用领域及特点 节
    • 一、PCR应用特点 节
    • 二、PCR应用领域 节
  • 第九节　其它链扩增技术及应用范围 节
    • 一、免疫PCR 节
    • 二、转录依赖的扩增系统（Transcription-basedAmplification System , TAS） 节
    • 三、再生式序列复制技术（3SR） 节
    • 四、连接酶链式反应（Ligase ChainReaction,LCR） 节
    • 五、PCR-SSCP分析技术 节
    • 六、结语 节
  • 参考文献
• 第二十三章　DNA重组技术及其在基因诊断中的应用
  • 第一节　工具酶 节
    • 一、DNA限制性内切酶 节
    • 二、甲基化酶 节
    • 三、分子克隆化的另一些酶 节
      • （一）DNA聚合酶 节
      • （二）RNA聚合酶 节
      • （三）反转录酶 节
      • （四）核酸外切酶 节
      • （五）核酸酶S1 节
      • （六）DNA酶 节
      • （七）RNA酶 节
      • （八）连接酶 节
      • （九）末端转移酶 节
      • （十）碱性磷酸酶 节
  • 第二节　分子克隆载体 节
    • 一、质粒 节
      • （一）大肠杆菌质粒 节
      • （二）真核生物中的质粒 节
    • 二、噬菌体和病毒载体 节
      • （一）噬菌体λ载体的构建 节
      • （二）单链噬菌体载体 节
      • （三）猴病毒40（SV40） 节
      • （四）逆转录病毒 节
    • 三、柯斯质粒 节
    • 四、其他载体 节
      • （一）转座子载体 节
      • （二）人工微小染色体 节
  • 第三节　DNA重组实验中常用的技术 节
    • 一、质粒DNA的提取及鉴定 节
    • 二、DNA的重组 节
    • 三、地高辛配基随机标记DNA探针法 节
    • 四、核酸的分子杂交 节
    • 五、真核细胞基因组DNA的制备 节
    • 六、转移基因 节
  • 第四节　遗传病与肿瘤的基因诊断 节
    • 一、分离基因进行结构分析 节
    • 二、DNA限制性片段多态性连锁分析 节
    • 三、聚合酶链反应 节
  • 第五节　“DNA指纹”与法医鉴定
  • 参考文献
• 附录
  • 附录一　免疫细胞化学常用试剂介绍 节
    • 一、固定剂 节
    • 二、缓冲液 节
    • 三、显色液 节
    • 四、粘附剂 节
    • 五、封固剂 节
    • 六、酶消化液 节
    • 七、其它 节
  • 附录二　原位杂交组织化学常用试剂及处理 节
    • 一、杂交前准备 节
    • 二、关于探针的标记 节
    • 三、固定剂 节
    • 四、LB培养基 节
    • 五、小量质粒提取主要液体 节
    • 六、杂交前处理 节
    • 七、杂交用液 节
    • 八、杂交后漂洗溶液 节
    • 九、原位杂交信号显示 节
  • 附录三　全血细胞培养染色体技术常用试剂配制 节
    • 一、国内实验室应用试剂配制 节
    • 二、细胞培养（Bhatl B和McGee JOD,1990） 节
  • 附录四　实验室常用技术参数资料 节
    • 一、核酸及蛋白质常用数据 节
    • 二、常用缓冲液 节
    • 三、常用酶的配制 节
    • 四、常用抗生素溶液 节
    • 五、常用贮存液的配制 节
    • 六、常用凝胶的技术参数 节
    • 七、氨基酸的特性 节
    • 八、遗传密码 节
    • 九、常用酸碱技术参数 节
    • 十、放射性核素数据 节
    • 十一、原子量 节
  • 本书常用缩写词